Enzymer
Det finns också snabbmetoder för att undersöka om bakterierna är bärare av enzymer som bryter ned antibiotika. De enzym som rutinmässigt undersöks är förekomst av:
b-laktamas (penicillinas) vilket är ett enzym som hydrolyserar b-laktamringen i penicilliner som då inaktiveras. b-laktamasbildande stammar har inte alltid så höga MIC-värde att de vid andra resistensundersökningsmetoder skulle klassas som resistenta. Undersökning avseende b-laktamasproduktion görs därför parallellt med microdilution när stafylokocker undersöks. Flera olika metoder finns och nedan beskrivs två vanliga metoder.
Klöverbladsmetoden är ett enkelt och säkert sätt att påvisa b-laktamasproduktion. En agarplatta inokuleras jämnt med en bakteriestam som är känslig för penicillin (teststam). I centrum av plattan läggs en pappersdisk med penicillin (ofta 10 µg). Radiellt ut från pappersdisken stryks de stammar som ska analyseras för penicillinas produktion samt en positiv och en negativ kontrollstam. Efter ett dygns inkubering kontrolleras det att teststammen har hämmats kring penicillindisken. Längs med "stryket" av stammar som bildar b-laktamas kan teststammen "växa med" längre in mot penicillinlappen eftersom penicillinet runt dessa stammar har hydrolyserats och blivit inaktivt. Om enbart fyra positiva stammar testas på en platta kommer hämningszonen att se ut som en fyrklöver - därav metodens namn.
Snabbmetod med kromogena cefalosporiner: Cefalosporiner har en b-laktamring i sin struktur. Bland de olika cefalosporinet som utvecklas finns några där hydrolys av b-laktamringen medför en färgförändring av substansen, därav uttrycket kromogena.
Nitrocefin är en kromogen cefalosporin som finns kommersiellt tillgänglig intorkad på filterpapperslappar. Lappen läggs direkt på agarytan på ett ställe med god växt av det isolat som ska undersökas. Lappen suger upp fukt från mediet och om b-laktamas finns bildat i de kolonier man lagt lappen på kommer den inom 30 min att ändra färg från gul till röd.
Det är viktigt att testen inte görs på medier som innehåller blod eller serum då det i serum finns ämnen som förorsakar en falskt positiv reaktion. Om man bara har tillgång till en kultur på blodagar kan lappen läggas på t ex ett objektglas och fuktas med destillerat vatten varefter kolonimaterial överförs till lappen med en ögla. Det är dock av stor vikt att lappen inte torkar ut under de 30 min som reaktionen tar. I viss mån kan b-laktamasproduktion vara inducerbar, speciellt hos koagulasnegativa stafylokocker.
Uppdaterad: 2024-06-17.
